1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2. 取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中；
3. 離心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
5. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
7. 凍存：①利于已人設子系統軟件的，規定的凍存子系統軟件為降低體溫的傳輸率-1～-2℃/ min；當體溫達-25℃接下來時，可增加到-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可短時間內溶解液氮中。②也可將可裝生殖細胞的凍存管放-20℃2h ，后來放-70℃中留宿，拆下凍存管，移入液氮袋子內。
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